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新型机械敏感性离子通道在软骨细胞凋亡中的作用机制

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文档简介:

·1820·主堡塞坠处叠盘盍!!!!生!!旦筮丝鲞筮!!塑垦!也』垦狸坠垡:堕!!!坐!竺呈!!!:!!!:翌尘丛旦新型机械敏感性离子通道在软骨细胞凋亡中的作用机制王天宝李晓飞冷萍荣春张钊李晓东张海宁作者单位:266003青岛大学附属医院关节外科(王天宝、李晓飞、李晓东、张海宁),药剂科(冷萍),手术室(荣春);266003青岛海慈医院关节外科(张钊)王天宝、李晓飞为共同第1作者通信作者:张海宁,Email:zhhaining@hotmail.comDOI:10.3760/cma.j.issn.100l-9030.2017.11.003【摘要】目的观察新型机械敏感性离子通道压电蛋白1(Piez01)在骨性关节炎患者软骨细胞中的表达并探讨其在软骨细胞凋亡中的作用机制。方法体外培养骨性关节炎患者退变软骨细胞,利用细胞体外加力实验系统(Fx.5000TensionSystem)处理细胞,根据预实验结果分成0h加力组(空白组)、2h加力组、12h加力组、24h加力组、48h加力组和相应的抑制剂红玫瑰毛蜘蛛来源刮刀样机械敏感毒剂4型(GsMTx4)组、抑制剂氟甲基酮(z.ATAD.FMK)组。利用反转录一聚合酶链反应(RT—PcR)检测不同力学条件刺激下各组细胞的Piez01、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶一12(caspase—12)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活因子4(ATF4)和c/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(cHOP)的表达量。钙离子荧光探针(Flu03一AM)试剂盒检测空白组,加力组和抑制剂组细胞胞质内的钙离子含量。膜联蛋白V一碘化丙锭(AnnexinV—PI)凋亡试剂盒检测各分组的凋亡。结果(1)Pize01mRNA在骨性关节炎退变软骨中有少量表达,且12h加力组表达量增加,为51.21±7.42(采用2““‘的方法无计量单位),24h加力组达到高峰,为153.98±10.34,48h加力组为73.98±14.01,与24h加力组比较,PiezolmRNA的表达出现下降(P=O.013)。内质网应激信号分子caspase一12、PERK、GRP78、ATF4和cHOP的mRNA的表达也出现相同趋势。(2)2h加力组软骨细胞胞质中的钙离子较空白组有所增加,钙离子荧光强度由(226±25)nm增加到(48

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